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'''免疫沈降法'''(めんえきちんこうほう)とは、'''[[免疫沈降反応]]'''(可溶性の[[抗原]]と[[抗体]]が特異的に反応して不溶化し沈殿する反応)を利用して抗原を検出・分離・精製する、[[生化学]]の実験手法のこと。実験室では'''免疫沈降'''という略称で呼ばれることもある。 ==概要と原理== 基質と抗体を多数[[架橋]]させることで、大きな構造体として不溶化させる。通常は抗体を[[セファロースビーズ]]などの[[担体]]に結合させ、より沈殿しやすくする。最近ではプロテインAやプロテインGを結合させた超常磁性の磁気ビーズを使用する方法もよく行われる。磁気ビーズ法では多孔性のセファロースやアガロースと比べてバックグラウンドを低く抑えられ、短時間での実験が可能。モノクローナル抗体よりもポリクローナル抗体の方が免疫沈降を行いやすい。試料を比較的穏和な条件で処理でき、目的の基質に結合する因子の特定などに用いられる他、タンパク質の精製などにも用いられる。 ==手法== サンプルに特異性のない抗体(使用する場合は担体も)を混ぜ、[[遠心分離]]によって非特異的に吸着する成分を取り除く。上清に適当な濃度の特異性のある抗体を混ぜ、[[遠心分離]]で沈殿を回収する。沈殿を適当な[[バッファー]]で洗浄する。特異性が高く[[力価]]の高い抗体を用いれば比較的容易にできる。抗体の品質がポイントになることが多い。磁気ビーズ法では担体に磁気ビーズを使用し、遠心分離の代わりに磁石による分離を行う。遠心分離に比べて穏やかな条件下で分離精製ができ、夾雑物の少ないデータが得られることが多い。 ==[[タンパク質間相互作用]]検出への応用== 免疫沈降法によって、目的の[[タンパク質]]と相互作用する(特異的に複合体を形成する)別のタンパク質との複合体を回収する方法が、'''共免疫沈降法'''(Co-immunoprecipitation:Co-IP)である。 さらにこれの応用として、あらかじめ目的タンパク質に[[タグ]]を付けておき、タグとの結合を利用してこのような複合体を回収する方法もあり、'''プルダウン法'''(Pull-down assay)と呼ばれる(ただしタグ認識のために、抗体に限らずその他の特異的結合-例えば[[Hisタグ]]と[[ニッケル]][[キレート]]、GSTタグと[[グルタチオン]]、[[アビジン]]と[[ビオチン]]等-を用いる方法もある)。 [[Category:生物学の研究技術|めんえきちんこうほう]]
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